烟草品种抗病性鉴定中华人民共和国烟草行业标准(YC/T 41-1996),国家烟草专卖局于1996年4月3日发布,1996年6月1日实施。
1. 范围
本标准规定了由真菌、细菌、根结线虫引起的烟草根茎病害的抗性测定,致病性分化鉴定方法,以及烟草品种对病毒病抗性测定的方法。
本标准适用于室内和田间进行烟草抗烟草根茎病害,烟草病毒病的筛选和抗性鉴定。
2. 引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
YC/T 39-1996 烟草病害分级及调查方法。
3. 定义
本标准采用下列定义。
致病性分化 variation of pathogenically
病原菌由于突变、杂交、适应性变异,不同孢子细胞质的异质性致使生理小种的改变,导致致病性差异。
4. 品种抗病性鉴定
1. 烟草黑胫病(Black shank)
1. 病圃鉴定
1. 方法
品种抗病性的测定大多数是利用有病株连作烟田作病圃,诱其自然发病的方法,也可进行人工辅助接种。将苗龄50~60天的烟苗移至病圃,每个品种种植1行,不得少于三次重复,随机排列或顺序排列,每行20株以上,50行设抗病品种革新三号,中抗品种金星6007,感病品种设小黄金1025各一行为对照。另设当地种植的抗、中、感品种做辅助对照,若人工辅助接菌,烟草移至大田成活后(约10~20天)用菌谷接种(每株接种量视病地而异,新病地4g左右,老病地2~3g),接种后天气干旱要灌水,使田间土壤含水量处于饱和状态。
菌谷制作方法:将谷子煮至约一半谷粒开花捞出,装入三角瓶,高压灭菌1h。将已培养好的黑胫病菌种,接种到灭菌后冷却的谷子上,然后置于28~30℃下培养10~14天,即成。
2. 分级与调查方法
病害严重度分级应符合YC/T 39的规定。
调查时间:自然发病于病发初期、盛期和未期各调查一次,若人工接种则于接种后第20天、40天、60天各调查一次。每次均应调查各品种全部植株。
2. 室内接种鉴定
将苗龄40天左右的烟苗,移栽至直径20cm的花盆,每盆2株。也可不移栽,但留苗不可太密,株距5cm左右,待烟苗成活后,每株按0.25~0.5g菌谷量接种,置于28℃左右条件下诱发病害发生。接种后第3、5、7、10天后调查病性(病害严重度分级按YC/T 39的规定,计算发病率和病情指数)。
3. 致病性分化
1. 测定方法
选择苗龄40天左右的L8、N.C1071、N.nesophila、N.nudicaulis、DC202或A23、WS117和小黄金1025,将制备好的黑胫病菌谷每株按0.5 g进行土壤接种,或用孢子悬浮液(1000孢子数/ml)进行茎注射接种,观察各品种间的抗病性差异。病害严重度分级应符合YC/T 39的规定。
孢子悬浮液制备:将培养好的黑胫病菌,每管加入9ml无菌水,1ml1‰硝酸钾溶液,然后置于冰箱(10℃左右)24h后取出,加无菌水制成。
- 抗性评价及黑胫病不同生理小种在鉴别寄生主上的反应(见表1)
表1 0,1,2,3号黑胫病生理小种在鉴别寄主上反应
小种品种 |
0 1 2 3 |
|
小种品种 |
0 1 2 3 |
L8
C1071
N.nesophila |
R S R M
R S - R
S R - R |
N.nudicaulis
DC202或A23
WS117 |
R S - M
S S R S
S S - R |
注:R-抗病,病情指数25以下;S-感病,病情指数75以上;M-中感病或中抗,26~50中抗,51~75中感。 |
2. 青枯病(Granville wilt)
1. 田间鉴定方法
测定烟草品种抗青枯病的程度,一般在病区的连作田块自然发病,可以不经过人工接种观察对青枯病的抗性。随机或顺序排列,三次以上重复,每品种种植一行,每行20株,设抗病品种D101,感病品种长脖黄为对照。各地增设当地抗、中、感品种为对照,在田间发病初期、盛期和末期进行田间调查。调查时病害严重度分级应符合YC/T 39的规定。
2. 室内苗期接种
将苗龄40天的烟苗,移栽至瓦盆,待烟苗成活后,用根灌菌液的方法,每株灌20ml的细菌悬浮液(3×108细菌/ml),接种后置于28~30℃恒温室中,并将瓦盆放在盛水的瓷盘中保湿,观察发病情况。于接种后第7、10、15、21、30天按YC/T 39的规定进行调查,计算发病率和病情指数。
接种体制备:将20℃下保存于无菌水中的青枯菌,在肉汁培养基平板上划线,培养于28~30℃下,24h后挑取典型菌落移置于肉汁斜面,28℃24h后,再移至肉汁斜面,在28℃培养24h后用无菌水稀释,即成所需要的接菌浓度。
3. 抗性评价
划分4级:病情指数25以下为高抗,25.1~50为中抗,50.1~75为中感,75以上为高感。
4. 致病性分化
1. 鉴别寄主
花生:品种白沙;烟草:品种Tobacco Botton;茄子:品种黑霉;马铃薯:品种京丰;番茄:品种Bonny Best。
2. 鉴定方法
以上鉴别寄主,育苗后,当苗龄40天左右时,用伤根灌菌液(每株20ml细菌含量3×108细菌/ml)的方法接种后观察发病情况,并按YC/T 39的规定调查。
3. 结果统计
按其寄主范围划分三个生理小种。
小种1侵染:番茄、烟草、马铃薯、茄子、花生等;
小种2侵染:香蕉;
小种3侵染:马铃薯、番茄。
3. 黄瓜花叶病(Cucumber Mosaic)
1. 温室苗期接种鉴定
取有三片真叶的烟苗,在第二片真叶上撒少许400~500目的金刚砂,然后用纱布蘸取病毒汁液,在叶片上轻轻摩擦。大量苗子可以用喷枪接种,接种前在病毒汁液中加入1%金刚砂,高压喷射(压力为68947.6~206842.8Pa)喷口距接种物20cm,每株喷接0.5s。接种后保持在28℃条件下,第7、14、21天观察发病情况。按YC/T 39的规定进行病情调查。
2. 田间鉴定
田间一般采取自然发病,不进行人工接种。每个品种种植一行,至少三次重复。设T1245,铁把子为抗CMV对照,G28、亮黄烟为感病CMV对照,在烟草各生育期观察病害的发展,调查发病率,并按YC/Y 39的规定进行病害严重度调查,计算病情指数。
3. 抗性评价
划分4级:病情指数25以下为抗病,25.1~50为中抗,50.1~75为中感,75以上为高感。
4. 根结线虫病(Root-knot nematode)
1. 温室接种南方根结线虫1号小种(适用于其他根结线虫种或小种)
1. 待鉴定的材料
将苗龄35~40天的烟苗,移栽到有根结线虫的土中(病根及根际病土与消毒营养土按1:4混合),在室温25~30℃自然温度条件下生长两个月,拔出烟株,用自来水冲去根上泥土,并按YC/T 39进行根结线虫病病情调查。设长脖黄为感病对照,T1706和NC95为抗病对照。各地可设当地的抗、中、感品种为对照。
2. 接种体制备
在感病的番茄品种“Rutgers”接种繁殖根结线虫,在25~30℃下生长55~60天后即可作为接种体使用。
2. 田间鉴定
已知为根结线虫危害的田块,在自然发病条件下,鉴定品种对根结线虫的抗性,每品种至少一行,三次以上重复,收获期按YC/T 39的规定调查病情。对照品种与4.4.1相同。
3. 抗性评价
划分4级,病情指数25以下为抗病,25.1~50为中抗,50.1~75为中感,75以上为高感。
4. 根结线虫种及小种鉴定
1. 鉴定
四种危害烟草的根结线虫及其生理小种的鉴别寄主(见表2)。
接种法同4.3.1。
2. 病害严重度分级(表3)
附加说明:
本标准由全国烟草标准化技术委员会提出。
本标准由国家烟草专卖局归口。
本标准起草单位:中国烟草总公司青州烟草研究所。